发酵罐使用(最新整理)第二部分

来源: 微生物与制药/wswzywhb

6实消

6.1操作:打开搅拌,设置为低速度,一般为70r/min,实消一般分为夹套预热和罐体消毒两个部分,夹套预热先将套层的蒸汽阀门和排污管路阀门打开,通入蒸汽,加热直至罐内温度达到60~70℃,关闭夹套的蒸汽阀门和排污管路阀门,夹套预热完成。先观察蒸汽发生器压力表,确保蒸汽发生器出口蒸汽压力在0.4MP,打开罐底部入罐蒸汽阀门,打开外部隔膜阀,管道消毒10-15min,然后关闭外部隔膜阀,打开底部入罐蒸汽阀门,使蒸汽进入发酵罐内,打开罐顶部放气阀门,直至有大蒸汽排出,计时15min,排出冷空气,关闭罐顶部放气阀门,当温度达到90℃时,关闭低速搅拌,通过调整蒸汽发生器开关、蒸汽发生器阀门、罐底部入罐蒸汽阀门、罐底部隔膜阀门、罐顶部放气阀门,调整罐内压力为0.125Mpa、温度121℃,灭菌30min。

6.2口诀:开低速、夹套预热、管道消毒、排冷空气、罐体消毒

7冷却接种

7.1操作:实消完成后,先关罐底隔膜阀、罐顶部放气阀、打开外部隔膜阀,进行管道消毒10-15分钟,关闭外部隔膜阀和入罐蒸汽阀门。然后打开罐顶部放气阀门降压,直至罐内压力与粗细过滤器压力基本一致,打开入罐空气阀门,关小排污管路阀门,调整空压机开关、控制台开关、控制台空气流量调节旋钮、发酵罐上空气阀门、3个排污阀、罐顶部放气阀门,调整罐内压力、粗细过滤器压力为0.05MPa,进行风冷。当温度降低到90℃,开启低速搅拌,当温度将到60℃时,通入冷却水,进行水冷。当温度降至与培养温度相差5℃时,停止通入冷却水,让罐体自然冷却达到培养温度。当罐内温度达到培养温度时,进行接种操作。先将空气入罐阀门关小,维持罐内为正压,一般在0.01MPa,关闭转速。将火环酒精点燃,打开接种口,带上半湿的长筒手套(最好是灭菌的,加无菌水),将三角瓶瓶内的种子倒入发酵罐中,整个操作应在火焰保护下进行。然后关闭接种口,去掉火环。

7.2口诀:断蒸汽、降压、通空气、风冷、水冷、自然冷却、接种

8培养取样

8.1操作:通过控制台设置参数(通风量、转速、温度、pH值等),同时将控制开关均置于自动状态,在火焰保护下将补料瓶钢针插入补料口(补料瓶事先已经灭菌),同时在补料口塞入无菌棉花,封好口,避免杂菌进入,培养期间罐体始终保持0.05MPa的压力,通过各个阀门调整。待培养状态稳定后,校正溶氧电极100%,此时应开通水路,维持罐温。

培养发酵时,定时观察记录数据,及时补料消泡,每隔6h取样分析,尽可能防止异常现象的发生。取样时,应先打开罐底部入罐蒸汽阀门,打开外部隔膜阀,进行管道消毒10-15min,然后关闭罐底部入罐蒸汽阀门,同时用火焰封住取样口,打开无菌取样瓶,缓慢打开罐底部隔膜阀,取样,然后关闭罐底部隔膜阀,打开罐底部入罐蒸汽阀门,再次进行管道消毒10-15min,关闭外部隔膜阀,关闭罐底部入罐蒸汽阀门。

8.2口诀:设参数、加补料、校溶氧、培养、记录、取样

9放罐洗罐

9.1操作:达到发酵终点的各项指标时,结束发酵,放罐。放罐时,关闭空气系统、冷却水系统、搅拌,待罐压接近零时,打开放料阀,将发酵料液放入储罐中,以待后继工序处理。

发酵结束后,应及时进行发酵罐洗涤,洗涤可以采用浸泡、冲洗、毛刷等方式进行洗涤,确保不留死角,洗涤彻底,防治残留的培养基污染杂菌,同时洗涤完成后,应进行发酵罐的空消,杀灭罐内残留的各种微生物。以备再次使用。

9.2口诀:压差放罐、浸泡洗罐

10电极校正

10.1 pH电极校正操作:将控制台参数调整至电极校正,选pH电极校正,将电极浸入缓冲液pH4.4中,一获得稳定读数就立即将pH电极屏幕显示设定到缓冲液的值。将蒸馏水漂洗电极玻璃球泡部位,然后用软纸轻轻擦干,再浸入第二种缓冲液pH6.6中,获得稳定读数后,设定pH值。如此反复2~3次,直至读数与被测试剂相同并稳定。

10.2溶氧电极零点校正操作:将控制台参数调整至溶氧电极校正,选溶氧电极校正,将溶氧电极放入新配置的过饱和亚硫酸钠溶液中,待获得稳定数值,控制台屏幕数值都不在发生变化时设定零点。(需注意,100%溶氧度在实消完成后,各参数设定、接种后设定)。