我爱做实验│进过实验室的人,生命中都有一台HPLC

来源: 北京中医药大学中药学院/bucmzyxy

科研

Experiment Show Time

实验室中分离分析必备仪器是什么?

当然是HPLC

今天就来给大家介绍一下HPLC 的概况、结构组成和实际操作。


不闻不若闻之,闻之不若见之, 

见之不若知之,知之不若行之。 

——荀况(战国)   


(一)HPLC简介


HPLC(High Performance Liquid Chromatography )是高效液相色谱,又称"高压液相色谱"。

高效液相色谱色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。


(二)HPLC组成构造

高效液相色谱仪由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据记录与处理器组成。

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流动相储液体瓶

流动相储液体瓶的用途是贮存流动相,一个储液体瓶盛装一种流动相,不能混装


输液泵

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两种类型:恒流泵和恒压泵。

恒流泵使输出的液体流量稳定;而恒压泵则使输出的液体压力稳定。恒流泵中有往复泵,注射泵

恒压泵气动放大泵。其中往复泵最常用。

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进样针

两种类型(平头进样针、圆椎形进样针):平头进样针,用于HPLC进样阀和样品吸量管上。专用圆椎形针头,可经受多次进样,专门用在自动进样器进样针上。

现在很多都自动进样啦,很方便~~


色谱柱

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色谱柱的分离作用在填料与流动相之间进行,柱子的分类依据填料类型而定。

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检测器

检测器根据不同组分的性质,检测出分离分析的组分。主要有:紫外吸收检测器(UVD)、二极管阵列检测器(PDAD)、荧光检测器(FLD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)、质谱检测器(MSD)


数据记录与处理器

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数据记录与处理器具有获取与处理功能。能够把检测器检测到的信号显示出来。


(三)HPLC实操


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流动相前处理

(1)过滤水相可以直接采用娃哈哈或者屈臣氏纯净水,不用过滤。有机相如果是色谱级别的试剂也可以不用过滤了。含酸或者盐的缓冲液需要微孔滤膜,过滤时选择合适的滤膜。

(2)脱气:可采用超声脱气或在线脱气。一般采用超声脱气。

注:流动相最好现配现用,不要保存太长时间。


样品前处理

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样品先用合适的溶剂溶解,再用容量瓶定容到合适的浓度。最后采用注射器和合适的滤膜过滤到液相小瓶里面,备用。

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仪器设置

(1)仪器使用前流动相的各管路进行排气泡冲洗的操作。

(2)然后在泵关闭的状态下装上色谱柱(注意方向),进行色谱柱的平衡。

(3)之后参考文献,根据需要建立好自己的方法,将准备好的液相小瓶放入相应的样品架,准备批处理。

(4)最后,冲洗柱子


今天的内容就到这里了,

关于HPLC使用过程中的一些常见问题,

我们将会在下期内容里面给大家详细分解。

祝大家实验顺利,爱上做实验~~


编辑│六骑士