不同产地菊花质量研究

来源: 中国现代中药/zgxdzy


不同产地菊花质量研究


杨朝帆,董诚明*,邢冰,夏伟,田亚杰

(河南中医药大学,河南 郑州 450046)


[摘要]   目的:通过对市场上流通的不同产地、规格的杭菊、亳菊、滁菊、怀菊进行绿原酸、木犀草苷、槲皮素及3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸4个指标性成分含量的检测,根据含量的差异探讨品种、栽培地区等因素对菊花含量的影响,为菊花引种栽培提供理论依据。方法:采用紫外-可见分光光度计法测定总黄酮含量;采用HPLC测定菊花中绿原酸、木犀草苷、槲皮素及3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量。结果:综合分析,市场上流通的不同规格药用菊花中安徽滁州产区的滁菊质量较佳。结论:菊花的主要化学成分含量因栽培品种、栽培地区不同而存在明显差异。

[关键词]   菊花;质量评价;总黄酮

菊花为菊科菊属多年生草本植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序,有散风清热、平肝明目、清热解毒的功能,临床上用于治疗风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花、疮痈肿毒 [1]。菊花作为药食两用植物,在我国已有3000多年的栽培历史[2],因其产地变迁、加工方法的改进等,逐渐形成了不同的商品和规格,有杭白菊、毫菊(小毫菊)、大马牙(大毫菊)、贡菊、滁菊、怀菊等[3],其中以杭菊、亳菊、滁菊、怀菊最为有名,有“四大名菊”之称[4]。目前,国内外学者已经对菊花的产地变迁、栽培、遗传育种、类型之间的质量比较、药理作用等方面进行了大量研究,其活性成分主要有黄酮、绿原酸、挥发油等类成分,影响其质量的因素涉及品种、栽培条件、采收时间、产后加工、炮制和贮存等[5-7]。2015年版《中华人民共和国药典》(《中国药典》)一部中,菊花药材按产地及加工方法不同,分为“亳菊”“杭菊”“滁菊”“怀菊”“贡菊”。《中国药典》以绿原酸、木犀草苷及3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸为检测指标进行含量测定。本文通过对市场上流通的不同规格的杭菊、亳菊、滁菊、怀菊进行绿原酸、木犀草苷、槲皮素、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸以及总黄酮含量的检测,并对主要化学成分进行比较分析,以期探讨菊花内在化学成分之间的关联性,从而进一步为菊花质量评价提供依据。

1  材料与仪器

1.1 材料

样品为市场流通的药用菊花,经河南中医药大学董诚明教授鉴定为菊花Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序,具体样品信息见表1。

1.2 仪器与试剂

UV-3200S型紫外可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司);Waters 2596 型高效液相色谱仪。

对照品绿原酸(纯度≥98%,批号:110753-200413)、槲皮素(纯度≥ 98%,批号:100081-200907)、木犀草苷(纯度≥98%,批号:720-200905)和芦丁(纯度≥98%,批号:100080-9303)均购于中国食品药品检定研究院;3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品(纯度≥ 98%,CAS号码:2450-53-5)购于四川维克奇生物科技有限公司;甲醇、乙腈为色谱纯;水为超纯水,其他试剂均为分析纯。

2  方法

2.1 水分测定

参照《中国药典》2015版通则0832第二法进行测定[1]

2.2 总黄酮含量的测定

参考刘利军等[8]的实验方法测定总黄酮含量。

2.2.1  对照品溶液制备 精密称定芦丁对照品5.1 mg,置25 mL锥形瓶中,加70%甲醇制成每1 mL含芦丁0.204 mg的溶液,即得。

2.2.2  标准曲线的制备 精密量取204 μg·mL-1的芦丁对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0 mL,分别置于10 mL带刻度试管中,各加入5%的亚硝酸钠0.3 mL,摇匀,放置6 min,加入10%硝酸铝0.3 mL,摇匀,放置6 min,4%的氢氧化钠2 mL,加70%乙醇定容至刻度,摇匀,放置10 min,在510 nm波长处测定吸光度,以芦丁含量为横坐标,吸光度为纵坐标做线性回归,回归方程为Y=12.436X-0.001 6,r=0.999 8,表明芦丁在0~0.816 mg吸光度与芦丁含量呈良好的线性关系。

2.2.3  供试品溶液的制备 精密称取1 g过五号筛的菊花粉末,于具塞磨口锥形瓶中,加入70%乙醇30 mL,60 ℃水浴0.5 h,取出抽滤,洗涤,置100 mL的容量瓶,70%乙醇定容至刻度,精密量取3 mL于10 mL容量瓶中,用30%乙醇定容至刻度,静置备用。

2.2.4  含量测定 精密量取供试品溶液2 mL于10 mL带刻度的试管中,以不加供试品为空白对照,照2.2.2进行测定。

2.3  绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、槲皮素的含量测定

2.3.1  色谱条件 色谱柱:Xaqua C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)-0.2%磷酸(B),梯度洗脱,程序见表2;检测波长:348 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。对照品及供试品溶液色谱图见图1。

注:A.对照品溶液;B.供试品溶液;1.绿原酸;2.木犀草苷;3.3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸;4.槲皮素。
图1 混合对照品及菊花样品HPLC图

2.3.2  混合对照品溶液的制备 精密称取绿原酸4.62 mg、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸3.06 mg、木犀草苷1.46 mg、槲皮素3.46 mg,于10 mL量瓶中,用70%甲醇水溶解并稀释至刻度,摇匀,4 ℃密封避光保存,备用。

2.3.3  供试品溶液制备 精密称取菊花粗粉0.5 mg,置具塞锥形瓶中。精密加入70%甲醇水50 mL,称量。超声处理40 min,补足失重。摇匀,取续滤液,用微孔滤膜(0.22 μm)滤过,备用。

2.3.4  线性关系考察 精密量取混合对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL,按2.3.1色谱条件测定,以峰面积为纵坐标(Y),进样量为横坐标(X),绘制标准曲线,得到相应回归方程,见表3。

表3 绿原酸35-O-二咖啡酰基奎宁酸木犀草苷槲皮素的标准曲线及线性范围

2.3.5   样品含量测定 吸取各菊花供试品溶液10 μL,注入液相色谱仪,测定[9],即得。

3  结果与分析

3.1 含量测定结果

由表4含量测定结果可以看出,不同产地菊花样品在总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量上存在显著差异。菊花样品中总黄酮质量分数为6.67%~12.41%,其中以样品5和样品1较高,即江苏射阳产杭菊和安徽滁州产滁菊含量较高,分别为12.41%、10.49%,样品4即安徽亳州产杭菊的总黄酮含量较低,为6.67%;绿原酸含量以样品5即江苏射阳产杭菊绿原酸含量较高,为1.10%;样品6即浙江桐乡杭菊绿原酸含量较低,为0.52%;木犀草苷含量以样品6即浙江桐乡产杭菊含量较高,为0.54%;样品4即安徽亳州产杭菊的木犀草甘含量较低,为0.15%;3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量以样品1即安徽滁州滁菊含量较高,为3.83%;而样品4和6即安徽亳州产杭菊和浙江桐乡产杭菊较低,分别为1.37%、1.38%;槲皮素含量以样品8即河南武陟产白怀菊较高,为0.22%;而样品6和7即浙江桐乡产胎菊和杭菊较低,为0.03%、0.02%。

表4 不同产地菊花中总黄酮及4种化学成分的含量测定结果 %

注:同列数据不同小写字母表示差异有统计学意义(P<0.05);同列数据相同小写字母表示差异无统计学意义(P>0.05)。

3.2 相关性分析

利用SPSS 19.0软件,选择Pearson相关系数对各化学成分进行双侧t检验相关性分析,结果见表5。

表5 总黄酮绿原酸35-O-二咖啡酰基奎宁酸木犀草苷槲皮素含量的相关性分析表

注:*P<0.05水平(双侧)上显著相关。

由表5可以看出,菊花样品中绿原酸含量与总黄酮含量呈显著正相关,但与木犀草甘、槲皮素等黄酮类化学物质含量没有明显的相关性,同时与同为酚酸类的3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量也没有明显相关性。而木犀草苷含量与其他成分含量均呈负相关,由于样本量较小,无统计学意义。

3.3 变异系数权重法的综合评价

在综合评价中,权重系数是评价的关键,权重系数法可分为主观的专家咨询权数法,以及客观的因子分析权数法、独立性权数法和信息量权数法[10]。主观定权需要对指标进行打分,具有较强的主观影响,而本实验根据表征评价指标特征值之间的差异性,选客观的因子分析权数法,其变异系数越大,权重越大。选取指标中的总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量进行综合评价。具体计算步骤如下:


由最终得分可知,样品综合得分为M1>M5>M2>M3、M7> M8、M9>M6>M4,即滁菊(安徽滁州)>杭菊(胎菊,江苏射阳)>亳菊(大亳菊)>亳菊(小亳菊)、杭菊(浙江桐乡)>怀菊(白,河南武陟)、怀菊(黄,河南武陟)>杭菊(胎菊,浙江桐乡)>江苏杭菊(亳州引种)。安徽滁州的滁菊综合评价得分较高,为2.18,较其他地区菊花质量佳;而由亳州引种的江苏杭菊综合评价得分较低为1.16,较其他地区菊花质量差。

4  讨论

按《中国药典》进行含量测定时是按照样品的干燥品进行计算的;本文进行水分测定,是为总黄酮、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、槲皮素的含量计算时扣除水分,使所有样品在同一水平下进行含量比较,使实验结果更为严谨。

本实验在对结果进行分析时,先对菊花的各检测指标进行相关性分析,进而采用变异系数加权法进行综合分析。权重系数往往决定了数据的最终综合评分,权重系数一般分为主观和客观两种,主观是指专家咨询权数法,客观包括独立性权数法、分析权数法和信息量权数法。本实验选定信息量权数法进行权重系数的确定。采用加权平均法,将总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量设为评价菊花的5个条件来评价菊花样品的质量,各样品质量排序为滁菊(安徽滁州)>杭菊(胎菊,江苏射阳)>亳菊(大亳菊)>亳菊(小亳菊)、杭菊(浙江桐乡)>怀菊(白,河南武陟)、怀菊(黄,河南武陟)>杭菊(胎菊,浙江桐乡)>江苏杭菊(亳州引种)。滁菊(安徽滁州)样品得分最高,滁菊的总黄酮质量分数为 10.49%、绿原酸质量分数为0.90%、木犀草苷质量分数为0.23%、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸质量分数为3.83%、槲皮素质量分数为0.16%,较其他样品质量佳。本文研究结果与滁菊为“四大药菊”之首[11]的报道结果相一致。从菊花的总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量测定结果看,不同产地、不同品种菊花的5种成分含量差异较大,可能与种植、采收、产地加工、环境、土壤、气候等因素有关,有待进一步考察研究。

在本实验质量排序中,杭菊(胎菊,江苏射阳)>杭菊(浙江桐乡)> 杭菊(胎菊,浙江桐乡)>江苏杭菊(亳州引种)的结果也与索风梅等[4]的“杭菊和亳菊对生态环境的要求相对较高”这一观点相一致。药材具有一定的道地性,同种异地种植的药材,江苏杭菊(亳州引种)与亳菊(亳州)、杭菊(浙江、杭州、江苏)在质量上有明显差异,表明药材要遵循其道地性原则及其产地适宜性原则[4]


参考文献(略)



 声    明  

来源:《中国现代中药》

杨朝帆,董诚明*,邢冰,夏伟,田亚杰,2018,20(6):716-720.

http://www.zgxdzy.net/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20180616&flag=1

新媒体编辑:周鹭

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