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高效液相色谱法的优点（与经典液相色谱法相比）
①颗粒极细、规则均匀的固定相(键合相)，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；
②高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快；
③高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达10-9g，而荧光检测器最小检测限可达10-12g。
高效液相色谱法的优点（与气相色谱相比）
①不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；
②可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高；
③般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。
一、主要类型：分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法、空间排阻色谱法、化学键合相色谱法
二、高效液相色谱法的固定相
这一部分的内容看着较为繁琐，在以往真题中涉及到的题目并不多，这一部分内容主要以理解为主，说几个大家可能注意不到的点。
1. 非极性键合相常用于反相色谱；氨基键合相不宜分离带羰基的化合物，流动相中也不得含有羰基化合物
2. 使用硅胶基质的化学键合相时pH维持在2-8范围内
3. 手性固定相适用于的化合物类型：蛋白类，多糖，环糊精，大环抗生素类，π-氢键型等
三、高效液相色谱法的流动相
1. 流动相对分离的影响，同样用分离方程式表示。（已在气相色谱讨论过），n由固定相及色谱柱填充质量决定，α主要受溶剂种类的影响，k受溶剂配比的影响。
2. 增加流动相中强溶剂的比例，其洗脱能力增强，k变小
3. 溶剂的强度和选择性部分的内容理解即可。
四、正相化学键合相色谱法
1. 采用极性键合相为固定相，例如氰基、氨基或二羟基等键合在硅胶表面，以非极性或弱极性溶剂做流动相。
2. 主要用于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物。
3. 极性强的组分保留因子大，后洗脱出柱。流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分k减小。
五、反向化学键合相色谱法（重点内容）
1. 影响保留行为的因素：
（1）离子对试剂的种类和浓度：碳链长度增加，溶质的k增大；在一定范围内试剂的浓度升高，溶质的k增大
（2）流动相的pH：有利于组分和离子对试剂离子化时（离子对的形成），组分的k值最大
（3）固定相 、流动相性质
2.适用范围：有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化合物的混合物。
3.分析酸类或带负电荷物质：用季铵盐，如四丁基铵磷酸盐（TBA）和溴化十六烷基三甲基铵（CTAB）等。
分析碱类或带正电荷的物质：用烷基磺酸盐或硫酸盐，如正戊烷基磺酸钠（PICB5）、正己烷基磺酸钠（PICB6）
1. 速率理论
涡流扩散：球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。
纵向扩散：可以忽略
传质阻抗：选用低黏度的流动相
2. HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。
3. 反相离子对色谱法的分离条件：
固定相：尽可能选择表面覆盖度高且疏水性强的非极性键合相
离子对试剂：离子对试剂所带的电荷应与试样离子的电荷相反
流动相pH：使试样组分与离子对试剂全部离子化
4. 反相键合相色谱法的分离条件
固定相：非极性键合相如ODS
流动相：以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂
弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂
加入0.1%~1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用
主要掌握检测器部分的内容。
1. 专属性检测器：紫外检测器和荧光检测器
通用性检测器：示差折光和蒸发光散射器
2. 紫外检测器
特点：灵敏度较高（10-6～10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。
局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。
3. 荧光检测器：
特点：选择性好，专属型检测器;灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10 g/ml）
适用范围：生物胺、维生素和甾体化合物。
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