动物模型研究∣斑秃动物模型制备规范（草案）

    斑秃（AA）是一种突发性非瘢痕性脱发疾病，也是一种慢性炎症性皮肤疾病，在世界范围内发病率为0.1%～0.2%。其特点是：圆形或卵圆形脱发斑，脱发区皮肤变薄，感觉正常，无自觉症状，可发生于任何年龄，男女均可发病，头皮为最常见发病部位，发病后5%～10%的病例可迅速发展，在数天或数月内头发全部脱落而成全秃(AT)，少数严重患者眉毛、胡须、腋毛、阴毛都可脱落而成普秃（AU）。现斑秃模型为病理性模型，以西医指标为主。基于对斑秃中西医临床病症特点分析及对现有动物模型大量实验研究，形成如下斑秃动物模型制备规范（草案）。

      现用于制备斑秃模型的动物主要是小鼠，如C3H/HeJ 小鼠和C57BL/6 小鼠。一般选成年小鼠，雌雄各半或单一性别。

2.1.1原理  咪喹莫特干扰素诱导剂与细胞表面的Toll样受体7(Toll-like receptors7，TLR7)结合后可使小鼠脱毛，制备斑秃模型。

2.1.2方法  选取6～8 周龄，SPF 级，健康雄性 C3H/He J 小鼠，外观毛发完好无损。适应性饲养1周后，项部涂敷咪喹莫特乳膏，每周3次。每次小心取出小鼠，用清洁医用棉签酌取咪喹莫特膏体约 0.05g，均匀涂敷至项部皮肤，涂抹范围约1.5cm×1.5cm。每周3次。每次涂药前均用生理盐水清洁局部，以去除前次残留药物。给药30～60d，给药部位形成>1cm×1cm大小的斑秃面积，制备模型成功。本模型可维持17～39d。

2.2.1原理  抗肿瘤药物环磷酰胺可引起毛发脱落，是常见的生长期秃发，这些药物在消灭迅速分裂的癌细胞同时，也攻击毛囊四周迅速分裂的细胞，可制备斑秃模型。

2.2.2方法  选取6～8 周龄，SPF 级，雌性，C57BL/6 小鼠，将小鼠用乙醚轻度麻醉后，将按1∶1比例混合的松香和石蜡加热融化后涂于背部，凝固变硬后揭去，诱导生长期毛发范围约为3cm×4cm。于拔毛后第8～9天，小鼠背部皮肤诱导生长期毛囊产生，单剂量腹腔注射环磷酰胺 150 mg·kg-1，注射环磷酰胺 4～5d后，小鼠头部和背部毛发开始出现脱落，成功诱导严重的毛发脱落，制备出生长期秃发动物模型。本模型可维持20d左右。

2.3.1原理  IFN-γ可上调毛周细胞表面主要组织相容性复合物（MHC-I）的表达，从而使原来受免疫赦免状态保护的生长期毛囊失免疫赦免，毛囊受攻击而发生斑秃，制备斑秃模型。

2.3.2方法  选取C3H/HeJ小鼠，雄性，SPF级。用脱毛术（同2.2项）使所有小鼠毛囊生长周期进入生长期，达到同步化的目的。进入实验的小鼠，每天尾静脉注射干扰素-γ 2×104U·mL-1的稀释液0.1mL，连续注射3d，休息7d；然后重复上述操作2个月。IFN-γ注射，加速了有斑秃易感基因鼠种( C3H/HeJ )小鼠器官特异性疾病斑秃的发展。实验第3天出现块状脱毛，第42天原部分脱毛区有新生毛发长出，第52天新生毛发再次脱落，且脱毛呈进行性发展，小鼠腹部毛全部脱光，背部也有小块脱毛区出现。这一过程类似人类进展性斑秃发病表现。本模型可进行性发展数月。

    动物的毛发脱落情况等是模型成功与否的最直接判定指标。

    斑秃模型制备成功后：①毛发片状脱落，单发或多发；②斑秃区皮色正常，无明显炎症反应；③斑秃区皮肤未见萎缩及瘢痕。

表观指标在斑秃临床诊断中占有重要地位，也是模型是否成功的直接指标，最具特点，权重系数0.5。

    局部皮肤病理观察的真皮浅层新生毛囊数、成熟毛囊数、真皮浅层毛细血管数等是模型成功与否的重要判定指标。

斑秃模型制备成功后，取斑秃区的皮肤组织约1cm2，固定、切皮、HE染色、镜检可见：真皮浅层新生毛囊数、成熟毛囊数目减少，毛囊萎缩，真皮浅层毛细血管数减少。

局部皮肤病理指标是斑秃模型成功与否的直接依据，权重系数0.4。

斑秃模型制备成功后，CD4+T、CD8+T细胞的浸润数目增多，IFN-γ、肿瘤坏死因子（TNF-α）等含量升高。

生化指标是部分斑秃模型（如咪喹莫特乳膏法造模）的重要指标，但特征性不强，是间接相关指标，权重系数0.1。

本制备规范介绍的是与斑秃中西医临床病症特点吻合度较高且应用较多的动物模型。其他模型如将自发斑秃的C3H/HeJ小鼠皮损部位移植到正常小鼠，也可诱导产生斑秃，但此方法依赖于自发斑秃的小鼠，大规模应用受限，且技术要求高等。未纳入本规范制备草案。

参考文献：（略）