临床微生物标本检验流程简介

       ◆正常人的血液是无菌的。
　　◆菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。
　　◆败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。
　　◆脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。

（一）常见病原菌

（二）标本采集

　　1.采血时间和频率　 
　　◆病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。
　　2.采血量　 
　　◆一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。 
　　3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。
　　4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。

（三）微生物分离培养和鉴定
　　1.培养基的选择　 
　　◆用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧＋厌氧，需氧＋高渗等。
　　2.分离和鉴定　当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：
　　◆（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；
　　◆（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；
　　◆（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。
　　（四）报告方式
　　阴性结果： 
　　◆7d报告无细菌生长。 
　　◆疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。
　　阳性结果——三级报告方式： 
　　◆第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验； 
　　◆第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验； 
　　◆第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。
　　（五）临床意义
　　◆葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。 
　　◆G-菌主要侵犯危及机体免疫功能低下的病人，耐药菌株不断增加。 
　　◆厌氧菌的菌血症常合并需氧菌感染，临床症状较重而复杂。 
　　◆L型菌的菌血症主要由于使用抑制细菌细胞壁合成的抗生素后，由缺损细胞壁的细菌感染所致。 
　　◆免疫低下者常出现真菌菌血症。 
　　◆院内感染菌血症不断上升。

（一）常见病原微生物 

（二）标本采集
　　◆用药前，无菌操作腰穿方法采集2～3ml，盛于无菌试管常温下立即送检。 
　　◆天冷时保温，不可冰箱保存。 
　　◆用于病毒检测时应冷藏送检。
　　（三）检验方法
　　1.涂片镜检　离心3000rpm，15分钟。 
　　革兰染色（一般细菌）、抗酸染色（分支杆菌）、墨汁染色（隐球菌）、电镜检查（病毒颗粒）。
　　2.分离培养　5g/L葡萄糖增菌肉汤、血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。 结核菌接种罗-琴培养基或米氏7H10培养基。真菌培养接种沙氏培养基。病毒培养常用动物接种、鸡胚接种、细胞培养。
　　3.血清学检测可直接检测抗原。
　　（四）临床意义
　　◆细菌性脑膜炎是中枢神经系统感染的常见类型。 
　　◆真菌性脑膜炎最常见于隐球菌脑膜炎，其他的真菌性脑膜炎如白假丝酵母、球孢子性脑膜炎日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易发。 
　　◆流行性乙型脑炎可获得持久免疫力，再次发病者极少见。 
　　◆肠道病毒对中枢神经系统的危害性逐渐引起人们的关注和重视。

呼吸道按解剖结构分为上呼吸道和下呼吸道。 
　　◆上呼吸道感染主要指喉及喉以上的呼吸道感染。 
　　◆下呼吸道感染主要指气管、支气管和肺的感染。
　　（一）上呼吸道的正常菌群 
　　1.球菌　凝固酶阴性葡萄球菌，链球菌，微球菌，奈瑟菌，厌氧球菌。
　　2.杆菌　棒状杆菌，嗜血杆菌，类杆菌，梭杆菌。
        （二）常见病原微生物 

（三）标本采集
　　1.采集方法
　　（1）上呼吸道：常采用鼻咽拭子；在扁桃体部位、咽后壁及口腔内炎症、溃疡或渗出部位采样时，应先用清水漱口，再采集标本。
　　（2）下呼吸道：常采用自然咳痰法、支气管镜采集、胃内采集、咽拭子。清晨第一口痰为宜，最好在用抗菌药物前采集，必须先用清水漱口，避免唾液混入。
　　2.立即送检。
　　（四）检验方法
　　1.涂片： 
　　◆检查细菌常用革兰染色、抗酸染色； 
　　◆检查隐球菌采用墨汁染色； 
　　◆军团菌、支原体、病毒等可用免疫荧光抗体染色。 
　　◆合格的痰标本： 
　　白细胞＞25个/低倍视野，鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野。 
　　2.分离培养
　　（1）痰标本的前处理一般是用无菌生理盐水将痰洗净，再加入胰酶溶液使痰均质化。
　　（2）普通细菌培养采用血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。
　　（五）临床意义
　　◆注意采集合格的下呼吸道标本，以提高检出率和阳性的正确率。 

       ◆一些条件致病菌和耐药菌成为医院内肺炎的主要致病菌。 
　　◆真菌性肺炎多为条件致病性真菌感染，常见的以白假丝酵母菌为主。 

◆上尿路感染：主要有肾盂肾炎 
◆下尿路感染：主要有膀胱炎和尿道炎

（一）常见病原菌 
　　◆肠毒素为主的病原菌： 
　　金葡，霍乱弧菌，志贺菌，ETEC/EHEC/EAggEC，产气荚膜梭菌，艰难梭菌 
　　◆侵袭性为主的病原菌： 
沙门菌，志贺菌，EPEC/EIEC，小肠结肠炎耶尔森菌，副溶血弧菌，结核分枝杆菌，白假丝酵母菌 
　　◆病毒：轮状病毒，埃克病毒，Norwalk病毒，腺病毒
　　（二）标本采集与运送
　　1.采集时间　急性期、尽量在用药前采集。
　　2.采集方法　 
　　◆自然排便采集法、直肠拭子。 
　　◆标本不能及时接种时，应在标本中加保护剂或用相应的运输培养基。 
　　（三）分离培养
　　培养基的选择： 
　　◆普通致病菌如沙门菌、志贺菌等可选用SS琼脂平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板。 
　　◆特殊细菌如弯曲菌、弧菌、厌氧菌等选择相应的选择性培养基。 
　　◆病毒可用细胞培养。
　　（四）临床意义
　　◆感染性腹泻由多种病原体感染所致。 
　　◆消化性溃疡由幽门螺杆菌感染引起。 
　　◆轮状病毒常引起幼儿腹泻，腺病毒是引起儿童腹泻的主要病原，还可引起成人腹泻，埃可病毒常引起婴幼儿腹泻，Norwalk病毒常感染成人和大龄儿童。

性传播疾病（STD）：以性行为为主要传播途径的-组传染病。
　　（一）常见性传播疾病及其病原体

性传播疾病

     梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿、细菌性阴道病、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹、

病原体   

     梅毒螺旋体、淋病奈瑟菌、杜克嗜血杆菌、沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿生物亚种、阴道加德纳菌和类杆菌等厌氧菌、沙眼衣原体沙眼生物亚种、支原体、人乳头瘤病毒、人类单纯疱疹病毒2型

　　（二）标本采集
　　◆拭子取尿道脓性分泌物（男性）或宫颈分泌物（女性），供培养及镜检； 
　　◆梅毒病人取皮肤渗出液和淋巴穿刺液涂片； 
　　◆疱疹抽取疱内液体，或刺破小疱后，用无菌拭子采样。

（一）常见病原菌