杨永革副总监曾在北京军区总医院（现中国人民解放军总医院第七医学中心）任职20余年，主任药师，教授。拥有丰富的一期临床试验经验，从事新药研究近20年，已完成几十种新药的药代动力学及生物等效性试验，现担任兴德通科学事务部副总监，本期带来《生物样本的测定》分享课程。
生物样本检测概述
生物分析方法验证
系统适应性：
在分析批开始最先进行，以确保系统正常运转。制备1份系统适用性样品并连续进样3次，以最后3次进样来评估系统适用性。
系统适用性接受标准：在同一分析批中待测物及内标保留时间的变异系数不得大于5.0%，待测物与内标色谱峰面积比值的变异系数不得大于15.0%。
选择性：
使用至少6个受试者的适宜的空白基质来证明选择性。当干扰组分在待测物保留时间处的响应低于分析物定量下限（LLOQ）响应的20%，内标保留时间处响应值不得超过同一个体空白基质配制的LLOQ样品内标响应值的5.0%通常即可接受。
基质选择 待测物对内标的干扰 内标对待测物的干扰
残留：
高浓度样品之后在双空白样品中的残留应不超过定量下限的20%，并且不超过内标的5%。
标准曲线：
方法验证中、未知样本测定中每种分析物和每一分析批，都应该有一条标准曲线。以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物色谱峰的峰面积比值为纵坐标，用线性最小二乘法(权重为1/X2)进行回归运算，求得直线回归方程，即为标准曲线。
定量下限（LLOQ,BLQ）:
标准曲线中的最低浓度。定量下限应具有可接受的准确度和精密度。实际应用中样本浓度低于定量下限时，Tmax之前的点按0处理，Tmax之后的点按“缺失”处理。
准确度：
准确度应报告为标示值的百分比。准确度=（测得值/真实值)xl00%
精密度：
对于验证批内精密度，至少需要一个分析批的4个浓度，即定量下限以及低、中、高浓度，每个浓度至少5个样品。对于质控样品，批内变异系数一般不得超过15%，定量下限的变异系数不得超过20%。
对于验证批间精密度，至少需要3个分析批（至少2天） 的定量下限以及低、中、高浓度，每个浓度至少5个样品。对于质控样品，批间变异系数一般不得超过15%，定量下限的变异系数不得超过20%。
稀释可靠性：
通过向基质中加入分析物至高于定量上限浓度，并用空白基质稀释该样品（每个稀释因子至少5 个测定值），来证明稀释的可靠性。稀释的可靠性应该覆盖试验样品所用的稀释倍数。随行标准曲线样品对稀释后样品进行测定。
基质效应：
正常血浆基质效应、溶血效应、高血脂效应
稳定性：
由新鲜制备的校正标样获得标准曲线，根据标准曲线分析质控样品，将测得浓度与标示浓度相比较，每一浓度的均值与标示浓度的偏差应在±10% 范围内。
质控样品：
每个分析批至少包含低、中、高3个浓度的质控样品（每个浓度水平至少2份）。含准确度精密度的分析批，低、中和高浓度的准确度与精密度样品也作为质控样品。
回收率：
待测物的提取回收率、内标的提取回收率
分析批最大的进样数量：
在对已被验证的分析方法进行小幅改变情况下，根据改变的实质内容，可能需要部分方法验证。应报告所有的改变，并对重新验证或部分验证的范围说明理由。
方法学验证时间太长时做部分验证。
试验样品分析
分析批：
一个分析批包括空白样品和零浓度样品，包括至少6个浓度水平的校正标样，至少4个浓度水平质控样品，以及被分析的试验样品。
分析批的接受标准：
校正标样测定回算浓度一般应在标示值的±15%范围内，定量下限应在±20%范围内。不少于6个校正标样，至少75%标样应符合这些标准。
试验样品的重新分析和报告值选择：
应该在试验计划或标准操作规程中预先确定重新分析试验样品的理由以及选择报告值的标准。在试验报告中应该提供重新分析的样品数目以及占样品总数的比例。
色谱积分：
应在标准操作规程中描述色谱的积分以及重新积分。任何对该标准操作规程的偏离都应在分析报告中讨论。
用于评价方法重现性的已检测样品再分析（ISR）:
在方法验证中使用标样和质控样品可能无法模拟实际试验样品，例如，蛋白结合、已知和未知代谢物的回复转化、样品均一性或同服药物引起的差异，可能影响这些样品在处理和储存过程中分析物的准确度和精密度。通过在另外一个分析批中重新分析试验样品，来评价实际样品测定的准确度。
顺序为方法学开发→方法学验证→稳定性研究。
问题2:是否需要对不同厂家的同品种药品分别进行方法学验证？
不同厂家生产的同种药品无需分别做方法学验证，检测单位参考本单位本种类药品已有方法学验证报告后做适当调整即可。
问题3:检测单位在完成检测以后对检测结果进行QC的周期？
QC周期通常不超过一周。
问题4:从方法学开发到出具方法学验证报告大致需要多久时间？
本单位已有此类方法学验证报告时约1月，没有时约2月。